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流式檢測

流式檢測

一、項目介紹

  流式細胞術是運用流式細胞儀對細胞或顆粒進行光譜鑒定、細胞分選、計數(shù),廣泛用于分析細胞表面和細胞內分子的表達水平、鑒定樣品中細胞群的不同細胞類型、評估各細胞亞群的純度以及分析細胞大小和內含顆粒。主要利用熒光標記的抗體檢測蛋白水平,或結合了特定細胞分子的熒光染料,如PI與 DNA 的結合。

二、應用

  常用于細胞表面分子如表面標記物的鑒定及水平分析,以鑒定、定性或定量特定類群的細胞,可以檢測細胞內蛋白表達水平,可以利用特定染料分析細胞周期、細胞凋亡,利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位,利用DHE等染料檢測細胞內ROS水平。

三、流式細胞儀通道

  流式細胞儀Beckman Coulter CytoFLEX;光學參數(shù):FSC(前散射)、SSC(側散射)、4色熒光通道;數(shù)據(jù)采集軟件:CytExpert。

激發(fā)波長 通道 發(fā)射波長 常見染料
488 nm FL1 525±20 nm FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488
FL2 585±21 nm PE、PI、DsRed
FL3 690±25 nm PerCP-Cy5.5、PC5
638 nm 660±10 nm APC、Alexa Fluor 647

四、結果展示

細胞周期

細胞凋亡

ROS檢測

JC-1線粒體膜電位

五、樣品保存運輸

  1、流式樣本接收注意事項

  ①細胞凋亡

  需要活細胞(外地樣本不接)。如果細胞帶熒光,一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注,否則按照無熒光處理。如果因此導致檢測結果不可用及樣本浪費,我方概不負責,也不接受退單。

  ②細胞周期

  周期需要細胞量比較多,6 孔板送樣要求匯合度在70%以上,但不能超過90%。外地樣品,需用預冷的70% 乙醇固定過夜后(貼壁細胞需要消化后進行固定),離心棄固定液,加1ml PBS重懸,封口膜封好,4℃運輸寄到實驗室。

  ③流式JC-1

  需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶紅光或綠光,不能檢測。

  ④ 流式ROS

  需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板),多提供2 個空白孔,做陰性和陽性對照。如果細胞帶綠光,不能檢測。

  ⑤細胞表抗

  提前確定公司是否有相應流式抗體(組化抗體不可用),其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。

  ⑥ 流式三標

  提前告知樣本具體數(shù)量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內染色至少需要1.5 ml,表抗需要約1 ml),注意防止凝血,4℃保存運輸。血樣4℃保存最多只能存放一周,時間越久實驗結果越差。取血后,需盡快寄到實驗室;取脾臟時盡量將動物帶到實驗室,直接在實驗室取材后開始實驗,若不能將動物帶到實驗室,取材(整個脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中,4℃保存,提細胞必須在取材后6 小時以內完成,注意有些檢測指標(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。

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