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人白介素ELISA試劑盒標(biāo)本常見問題解答
人白介素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人 IL-1α 單克隆抗體預(yù)包被在高 親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的IL-1α與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中IL-1α的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸 光度值。
人白介素ELISA試劑盒標(biāo)本保存會遇到哪些問題呢，一起來看看吧！
一、標(biāo)本保存不當(dāng)
在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性；標(biāo)本放置時(shí)間過長（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
二、標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，ELISA試劑盒干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
三、標(biāo)本凝集不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h完全凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已完全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用，解決的辦法zui好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>
四、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響
抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
五、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
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